流式细胞术（flow cytometry）
流式细胞技术FC
流式细胞技术（Flow Cytometry，FC）是一种对液流中排成单列的细胞或其它生物微粒（如微球、细菌、小型模式生物等）逐个进行快速定量分析和分选的技术。
一、相关试剂配方
1. 透膜缓冲液
取1mL 10x Permeabilization Buffer（eBioscience）充分混匀于9 mL超纯水中，现配现用。
2. 封闭液
1) 10% 阴性山羊血清：取1 mL阴性山羊血清（50012-8615，Solarbio）充分混匀于9 mL 1×PBS中，现配现用。
2) Human IgG：100 μL 10% 阴性山羊血清中加入2 μL Fc Block (130-059-901, 2mL；Miltenyi)。
3) 2.4G2：100 μL 10% 阴性山羊血清中加入2 μL Fc Block (2.4G2, 0.5 mg/mL；BD PharMingen)
4) D34-485：100 μL 10% 阴性山羊血清中加入2 μL Fc Block (D34-485, 0.5 mg/mL；BD PharMingen)
二、细胞胞内染色操作流程
1. 制备单细胞悬液。
2. 1xPBS洗涤2次，加入固定剂；
1) 靶标在胞内时加入4%PFA室温固定15分钟，500g离心5分钟，弃上清；1xPBS洗涤2次，加入透膜缓冲液室温孵育15分钟；
2) 靶标在核时加入Transcription Factor Staining Buffers，室温固定30分钟；
3. 1xPBS洗涤2次，500g离心，弃上清。
4. 封闭：加入封闭液（山羊血清），室温封闭15分钟。
5. 加入1xPBS稀释好的抗体，2-8°C孵育30分钟；
6. 加入1xPBS洗涤1-2次500g离心，弃上清。
7. 如非荧光染料直标抗体加入荧光二抗，2-8°C避光孵育30分钟。
8. 加入1xPBS洗涤1-2次，500g离心，弃上清。
9. 加入适量1xPBS重悬细胞，利用流式细胞仪分析细胞。
二、细胞胞外染色操作流程
1. 制备单细胞悬液。
2. 阻断Fc受体，4°C封闭10-20分钟。根据细胞种属选择不同的封闭液。
3. 加入抗体，2-8°C孵育30分钟。
4. 加入1xPBS洗涤2次，500g离心，弃上清。
5. 如非荧光染料直标抗体加入荧光二抗，2-8°C孵育30分钟。
6. 加入1xPBS洗涤2次，500g离心，弃上清。
7. [可选]加入细胞活性染料（如7-AAD）染色细胞；
8. 加入适量1xPBS重悬细胞，利用流式细胞仪分析细胞。